当一种蛋白质在柱上随洗脱液下移至等电点处，此时其移动速度明显减慢;如果此时加上相同的第二个样品，它将以洗脱液移动的速度下降，直至追到正在慢移的第一个样品成分;所有样品必须在第一个样品峰尚未被洗脱之前加入，否则就不能聚焦;如果加入的第二个样品的等电点比第一个样品高，它可以越过第一个样品区先被洗脱出来